Sumu ya nyoka ina vimeng'enya vinavyofanya hidrolize vifungo vya carboxyl esta.Sehemu ndogo za hidrolisisi ni phospholipids, asetilikolini na acetate yenye kunukia.Enzymes hizi ni pamoja na aina tatu: phospholipase, acetylcholinesterase na esterase ya kunukia.Esterase ya arginine katika sumu ya nyoka inaweza pia kutengeneza arginine ya sintetiki au lysine hidrolisisi, lakini hasa huhairisha vifungo vya peptidi ya protini katika asili, hivyo ni mali ya protease.Vimeng'enya vinavyojadiliwa hapa hufanya kazi tu kwenye substrates za esta na haziwezi kufanya kazi kwenye kifungo chochote cha peptidi.Miongoni mwa enzymes hizi, kazi za kibiolojia za acetylcholinesterase na phospholipase ni muhimu zaidi na zimejifunza kikamilifu.Baadhi ya sumu za nyoka zina shughuli kali ya kunukia ya esterase, ambayo inaweza hidrolize p-nitrophenyl ethyl ester, a - au P-naphthalene acetate na indole ethyl ester.Bado haijulikani ikiwa shughuli hii inatolewa na kimeng'enya huru au athari inayojulikana ya carboxylesterase, achilia mbali umuhimu wake wa kibiolojia.Wakati sumu ya Agkistrodon halys Japonicus ilipoguswa na p-nitrophenyl ethyl ester na indole ethyl ester, hidrolisaiti za p-nitrophenol na indole phenol hazikupatikana;Kinyume chake, ikiwa esta hizi zitaguswa na sumu ya nyoka aina ya cobra Zhoushan na sumu ya nyoka ya Bungarus multicinctus, zitatolewa kwa hidrolisisi haraka.Inajulikana kuwa sumu hizi za cobra zina shughuli kali ya cholinesterase, ambayo inaweza kuwajibika kwa hidrolisisi ya substrates zilizo hapo juu.Kwa kweli, Mclean et al.(1971) iliripoti kwamba sumu nyingi za nyoka za familia ya Cobra zinaweza kutengeneza hidrolisisi indole ethyl ester, naphthalene ethyl ester na butyl naphthalene ester.Sumu hizi za nyoka hutoka kwa: cobra, cobra black necked, black lipped cobra, gold cobra, Egyptian cobra, king cobra, golden cobra mamba, black mamba and white lipped mamba (D. aw bado anajua eastern rhombola rattlesnake).
Sumu ya nyoka inaweza kutayarisha hidrolisisi methyl indole ethyl ester, ambayo ni substrate ya kubainisha shughuli za kolinesterasi katika seramu, lakini sumu hii ya nyoka haionyeshi shughuli ya kolinesterasi.Hii inaonyesha kuwa kuna esterase isiyojulikana katika sumu ya cobra, ambayo ni tofauti na cholinesterase.Ili kuelewa asili ya enzyme hii, kazi zaidi ya kujitenga inahitajika.
1, Phospholipase A2
(I) Muhtasari
Phospholipase ni kimeng'enya ambacho kinaweza kutengeneza phosphate ya glyceryl.Kuna aina 5 za phospholipase katika asili, ambazo ni phospholipase A2 na phospholipase.
A. , phospholipase B, phospholipase C na phospholipase D. Sumu ya nyoka hasa ina phospholipase A2 (PLA2), sumu chache za nyoka zina phospholipase B, na phospholipase nyingine hupatikana hasa katika tishu za wanyama na bakteria.Kielelezo 3-11-4 kinaonyesha tovuti ya hatua ya phospholipases hizi kwenye hidrolisisi ya substrate.
Miongoni mwa phospholipases, PLA2 imesomwa zaidi.Inaweza kuwa kimeng'enya kilichochunguzwa zaidi katika sumu ya nyoka.Substrate yake ni dhamana ya ester kwenye nafasi ya pili ya Sn-3-glycerophosphate.Kimeng'enya hiki kinapatikana kwa wingi katika sumu ya nyoka, sumu ya nyuki, sumu ya nge na tishu za wanyama, na PLA2 inapatikana kwa wingi katika sumu nne za nyoka za familia.Kwa sababu enzyme hii huvunja seli nyekundu za damu na kusababisha hemolysis, pia inaitwa "hemolysin".Watu wengine pia huita PLA2 lecithinase ya hemolytic.
Ludeeke kwanza aligundua kuwa sumu ya nyoka inaweza kutoa kiwanja cha hemolytic kwa kutenda kwenye lecithin kupitia vimeng'enya.Baadaye, Delezenne et al.ilithibitisha kuwa sumu ya cobra inapofanya kazi kwenye seramu ya farasi au yolk, huunda dutu ya hemolytic.Sasa inajulikana kuwa PLA2 inaweza kutenda moja kwa moja kwenye phospholipids ya membrane ya erythrocyte, kuharibu muundo wa membrane ya erythrocyte na kusababisha hemolysis moja kwa moja;Inaweza pia kutenda kwenye seramu au lecithin iliyoongezwa ili kutoa lecithin ya hemolytic, ambayo hufanya kazi kwenye seli nyekundu za damu kutoa hemolysis isiyo ya moja kwa moja.Ingawa PLA2 inapatikana kwa wingi katika familia nne za sumu ya nyoka, maudhui ya vimeng'enya katika sumu mbalimbali za nyoka ni tofauti kidogo.Nyoka wa nyoka (C
Sumu ya nyoka ilionyesha shughuli dhaifu ya PLA2 pekee.Jedwali 3-11-11 linaonyesha ulinganisho wa shughuli za PLA2 za sumu 10 kuu za nyoka wenye sumu nchini Uchina.
Jedwali 3-11-11 Ulinganisho wa shughuli za phospholipase VIII za sumu 10 za nyoka nchini Uchina
Sumu ya nyoka
Kutolewa kwa mafuta
Asidi ya Aliphatic,
Cjumol/mg)
Shughuli ya damu CHU50/^ g * ml)
Sumu ya nyoka
Toa asidi ya mafuta
(^raol/mg)
Shughuli ya Hemolytic “(HU50/ftg * 1111)
Najanaja atra
9. 62
kumi na moja
Micracephal ophis
pointi tano moja sifuri
kalyspallas
8. 68
elfu mbili na mia nane
gracilis
V, mshipa
7. 56
* * #
Ofiophagus hana
pointi tatu nane mbili
mia moja arobaini
Picha ya Bnugarus
7,56
mia mbili themanini
B. multicinctus
pointi moja tisa sita
mia mbili themanini
Viper kwa russelli
pointi saba sifuri tatu
T, mucrosquamatus
pointi moja nane tano
Siamenisi
T. stejnegeri
0. 97
(2) Kutenganishwa na utakaso
Maudhui ya PLA2 katika sumu ya nyoka ni kubwa, na ni imara kwa joto, asidi, alkali na denaturant, ili iwe rahisi kusafisha na kutenganisha PLA2.Njia ya kawaida ni kutekeleza uchujaji wa gel kwenye sumu isiyosafishwa, kisha kufanya chromatografia ya kubadilishana ioni, na hatua inayofuata inaweza kurudiwa.Ikumbukwe kwamba kufungia-kukausha kwa PLA2 baada ya chromatografia ya kubadilishana ioni haipaswi kusababisha mkusanyiko, kwa sababu mchakato wa kufungia-kukausha mara nyingi huongeza nguvu ya ionic katika mfumo, ambayo ni sababu muhimu inayosababisha mkusanyiko wa PLA2.Mbali na mbinu za jumla zilizo hapo juu, mbinu zifuatazo pia zimepitishwa: ① Wells et al.② Analogi ya substrate ya PLA2 ilitumika kama ligand kwa kromatografia mshikamano.Ligand hii inaweza kushikamana na PLA2 katika sumu ya nyoka kwa Ca2+.EDTA hutumiwa zaidi kama ufahamu.Baada ya Ca2+ kuondolewa, uhusiano kati ya PLA2 na ligand hupungua, na inaweza kutengwa na ligand.Wengine hutumia 30% ya myeyusho wa kikaboni au urea 6mol/L kama ufahamu.③ Kromatografia ya haidrofobu ilifanywa kwa PheiiylSephar0SeCL-4B ili kuondoa ufuatiliaji wa PLA2 kwenye cardiotoxin.④ Kingamwili ya Kupambana na PLA2 ilitumika kama kamba kutekeleza kromatografia ya ushirika kwenye PLA2.
Hadi sasa, idadi kubwa ya sumu ya nyoka PLAZ imetakaswa.Tu et al.(1977) waliorodhesha PLA2 iliyosafishwa kutoka kwa sumu ya nyoka kabla ya 1975. Katika miaka ya hivi karibuni, idadi kubwa ya makala kuhusu kujitenga na utakaso wa PLA2 imeripotiwa kila mwaka.Hapa, tunazingatia kujitenga na utakaso wa PLA na wasomi wa Kichina.
Chen Yuancong et al.(1981) ilitenganisha spishi tatu za PLA2 kutoka kwa sumu ya Agkistrodon halys Pallas huko Zhejiang, ambayo inaweza kugawanywa katika asidi, neutral na alkali PLA2 kulingana na pointi zao za umeme.Kulingana na sumu yake, neutral PLA2 ni sumu zaidi, ambayo imetambuliwa kama presynaptic neurotoxin Agkistrodotoxin.Alkali PLA2 haina sumu kidogo, na PLA2 yenye asidi haina sumu yoyote.Wu Xiangfu et al.(1984) ililinganisha sifa za PLA2 tatu, ikiwa ni pamoja na uzito wa Masi, utungaji wa asidi ya amino, N-terminal, uhakika wa isoelectric, utulivu wa joto, shughuli za enzyme, sumu na shughuli za hemolytic.Matokeo yalionyesha kuwa walikuwa na uzito sawa wa Masi na utulivu wa joto, lakini walikuwa na tofauti kubwa katika vipengele vingine.Katika kipengele cha shughuli za enzyme, shughuli ya enzyme ya asidi ilikuwa ya juu kuliko shughuli ya enzyme ya alkali;Athari ya hemolitiki ya kimeng'enya cha alkali kwenye chembe nyekundu za damu za panya ilikuwa yenye nguvu zaidi, ikifuatiwa na kimeng'enya cha upande wowote, na kimeng'enya cha asidi kutoweka kwa urahisi.Kwa hiyo, inadhaniwa kuwa athari ya hemolytic ya PLAZ inahusiana na malipo ya molekuli ya PLA2.Zhang Jingkang et al.(1981) wametengeneza fuwele za Agkistrodotoxin.Tu Guangliang et al.(1983) iliripoti kuwa PLA yenye sumu yenye nukta ya 7. 6 ilitengwa na kusafishwa kutokana na sumu ya Vipera rotundus kutoka Fujian, na sifa zake za kimwili na kemikali, muundo wa asidi ya amino na mlolongo wa mabaki 22 ya amino asidi katika N. -terminal iliamuliwa.Li Yuesheng et al.(1985) alitenga na kutakasa PLA2 nyingine kutoka kwa sumu ya Viper rotundus huko Fujian.Sehemu ndogo ya PLA2 * ni 13 800, sehemu ya isoelectric ni 10.4, na shughuli maalum ni 35/xnioI/miri mg. Pamoja na lecithin kama substrate, pH mojawapo ya kimeng'enya ni 8.0 na joto mojawapo ni 65 ° C. LD5 hudungwa kwa njia ya mshipa kwenye panya.Ni 0.5 ± 0.12mg/kg.Enzyme hii ina athari ya wazi ya anticoagulant na hemolytic.Molekuli yenye sumu ya PLA2 ina mabaki 123 ya aina 18 za asidi ya amino.Molekuli ina wingi wa cysteine (14), asidi aspartic (14) na glycine (12), lakini ina methionine moja tu, na N-terminal yake ni mabaki ya serine.Ikilinganishwa na PLA2 iliyotengwa na Tuguang, uzito wa molekuli na idadi ya mabaki ya amino asidi ya isoenzymes mbili ni sawa, na muundo wa asidi ya amino pia unafanana sana, lakini idadi ya asidi aspartic na mabaki ya prolini ni tofauti kwa kiasi fulani.Sumu ya nyoka ya Guangxi king cobra ina PLA2 tajiri.Shu Yuyan et al.(1989) ilitenga PLA2 kutoka kwa sumu, ambayo ina shughuli maalum mara 3.6 zaidi ya sumu ya awali, uzito wa molekuli ya 13000, muundo wa mabaki ya amino asidi 122, hatua ya isoelectric ya 8.9, na utulivu mzuri wa joto.Kutokana na uchunguzi wa hadubini ya elektroni ya athari za PLA2 ya msingi kwenye seli nyekundu za damu, inaweza kuonekana kuwa ina athari ya wazi kwenye utando wa seli nyekundu za damu ya binadamu, lakini haina athari ya wazi kwa seli nyekundu za damu za mbuzi.PLA2 hii ina athari ya wazi ya ucheleweshaji kwenye kasi ya kielektroniki ya seli nyekundu za damu kwa wanadamu, mbuzi, sungura na nguruwe wa Guinea.Chen na wengine.Kimeng'enya hiki kinaweza kuzuia mkusanyiko wa chembe chembe za damu unaosababishwa na ADP, kolajeni na asidi ya arachidonic ya sodiamu.Wakati mkusanyiko wa PLA2 ni 10/xg/ml~lOOjug/ml, mkusanyiko wa chembe chembe za damu huzuiwa kabisa.Ikiwa sahani zilizooshwa zilitumika kama nyenzo, PLA2 haikuweza kuzuia mkusanyiko katika mkusanyiko wa 20Mg/ml.Aspirini ni kizuizi cha cyclooxygenase, ambayo inaweza kuzuia athari za PLA2 kwenye sahani.PLA2 inaweza kuzuia mkusanyiko wa chembe chembe za damu kwa hidrolisisi asidi ya arachidonic ili kuunganisha thromboxane A2.Muundo wa myeyusho wa PLA2 unaozalishwa na Agkistrodon halys Pallas venom katika Mkoa wa Zhejiang ulichunguzwa kwa njia ya dichroism ya duara, fluorescence na ufyonzaji wa UV.Matokeo ya majaribio yalionyesha kuwa mfuatano mkuu wa kimeng'enya hiki ulikuwa sawa na ule wa aina moja ya kimeng'enya kutoka kwa spishi nyingine na genera, uunganisho wa mifupa ulikuwa na upinzani mzuri wa joto, na mabadiliko ya muundo katika mazingira ya asidi yaliweza kubadilishwa.Mchanganyiko wa activator Ca2 + na enzyme haiathiri mazingira ya mabaki ya tryptophan, wakati kizuizi cha Zn2 + kinafanya kinyume chake.Njia ambayo thamani ya pH ya suluhisho huathiri shughuli za enzyme ni tofauti na vitendanishi hapo juu.
Katika mchakato wa utakaso wa PLA2 wa sumu ya nyoka, jambo la wazi ni kwamba sumu ya nyoka ina vilele viwili au zaidi vya PLA2.Jambo hili linaweza kuelezwa kama ifuatavyo: ① kutokana na kuwepo kwa isozimu;② Aina moja ya PLA2 inapolimishwa katika aina mbalimbali za mchanganyiko wa PLA2 zenye uzito mbalimbali wa molekuli, nyingi zikiwa kati ya 9 000~40 000;③ Mchanganyiko wa PLA2 na vipengele vingine vya sumu ya nyoka huchanganya PLA2;④ Kwa sababu dhamana ya amide katika PLA2 imetolewa kwa hidrolisisi, chaji hubadilika.① Na ② ni kawaida, isipokuwa chache tu, kama vile PLA2 katika sumu ya nyoka ya CrWa/w
Kuna hali mbili: ① na ②.Hali ya tatu imepatikana katika PLA2 katika sumu ya nyoka wafuatao: Oxyranus scutellatus, Parademansia microlepidota, Bothrops a ^>er, nyoka wa Palestina, nyoka mchanga, na nyoka wa kutisha.
Matokeo ya kesi ④ hufanya kasi ya uhamiaji ya PLA2 kubadilika wakati wa elektrophoresis, lakini muundo wa asidi ya amino haubadilika.Peptidi zinaweza kuvunjwa kwa hidrolisisi, lakini kwa ujumla bado zimefungwa pamoja na vifungo vya disulfide.Sumu ya nyoka wa shimo la mashariki ina aina mbili za PLA2, inayoitwa aina ya a na aina ya p PLA2 mtawalia.Tofauti kati ya aina hizi mbili za PLA2 ni asidi ya amino moja tu, ambayo ni, glutamine katika molekuli moja ya PLA2 inabadilishwa na asidi ya glutamic katika molekuli nyingine ya PLA2.Ingawa sababu kamili ya tofauti hii haiko wazi, inaaminika kwa ujumla kuwa inahusiana na kufutwa kwa PLA2.Ikiwa PLA2 katika sumu ya nyoka wa Palestina itawekwa joto na sumu hiyo ghafi, vikundi vya mwisho katika molekuli zake za kimeng'enya vitakuwa vingi zaidi kuliko hapo awali.Kutoka kwa C PLA2 iliyotengwa na sumu ya nyoka ina N-terminal mbili tofauti, na uzito wake wa molekuli ni 30000. Jambo hili linaweza kusababishwa na dimer asymmetric ya PLA2, ambayo ni sawa na dimer linganifu inayoundwa na PLA2 katika sumu ya rattlesnake ya mashariki ya diamondback. na western diamondback rattlesnake.Cobra ya Asia inaundwa na spishi ndogo nyingi, ambazo baadhi yake si za uhakika sana katika uainishaji.Kwa mfano, kile kilichokuwa kikiitwa spishi ndogo za Cobra Outer Caspian sasa kinatambulika
Inapaswa kuhusishwa na Cobra ya Bahari ya Caspian ya Nje.Kwa vile kuna spishi ndogo nyingi na zimechanganywa pamoja, muundo wa sumu ya nyoka hutofautiana sana kutokana na vyanzo tofauti, na maudhui ya isozimu ya PLA2 pia ni ya juu.Kwa mfano, sumu ya cobra
Angalau aina 9 za isozimu za PLA2 za r ^ ll aina zilipatikana ndani, na aina 7 za isozimu za PLA2 zilipatikana kwenye sumu ya spishi ndogo za nyoka Caspian.Durkin et al.(1981) ilichunguza maudhui ya PLA2 na idadi ya isozimu katika sumu tofauti za nyoka, ikiwa ni pamoja na sumu 18 za cobra, sumu ya mamba 3, sumu ya nyoka 5, sumu ya nyoka 16 na sumu 3 za nyoka wa baharini.Kwa ujumla, shughuli ya PLA2 ya sumu ya cobra ni ya juu, na isozymes nyingi.Shughuli ya PLA2 na isozimu za sumu ya nyoka ni za kati.Shughuli ya PLA2 ya sumu ya mamba na sumu ya rattlesnake iko chini sana au hakuna shughuli ya PLA2.Shughuli ya PLA2 ya sumu ya nyoka wa baharini pia iko chini.
Katika miaka ya hivi karibuni, haijaripotiwa kuwa PLA2 katika sumu ya nyoka inapatikana katika mfumo wa dimer hai, kama vile nyoka wa rhombophora wa mashariki (C. snake venom ina aina ya A na aina P PLA2, zote mbili zinajumuisha subunits mbili zinazofanana. , na dimerase pekee ina
Shughuli.Shen et al.pia ilipendekeza kwamba dimer tu ya PLA2 ya sumu ya nyoka ndiyo fomu hai ya kimeng'enya.Utafiti wa muundo wa anga pia unathibitisha kuwa PLA2 ya nyoka ya magharibi ya diamondback ipo katika mfumo wa dimer.Mchanganyiko wa Piscivorous
Kuna PLA mbili tofauti ^ Ei na E2 ya sumu ya nyoka, ambayo 仏 inapatikana katika mfumo wa dimer, dimer inafanya kazi, na monoma yake iliyotenganishwa haifanyi kazi.Lu Yinghua et al.(1980) ilisoma zaidi sifa za kimwili na kemikali na kinetiki za athari za E. Jayanthi et al.(1989) ilitenga PLA2 ya msingi (VRVPL-V) kutoka kwa sumu ya nyoka.Uzito wa molekuli ya monoma PLA2 ni 10000, ambayo ina madhara ya kuua, anticoagulant na edema.Kimeng'enya kinaweza kupolimisha polima zenye uzani tofauti wa Masi chini ya hali ya PH 4.8, na kiwango cha upolimishaji na uzito wa molekuli ya polima huongezeka na ongezeko la joto.Uzito wa molekuli ya polima inayozalishwa kwa 96 ° C ni 53 100, na shughuli ya PLA2 ya polima hii huongezeka kwa mbili.
Muda wa kutuma: Nov-18-2022